貨號：Q15131

存儲條件：2~30℃ 20%乙醇中保存(4℃有利于長期保存)

產(chǎn)品簡介：

離子交換層析 (IEX) 是目前在生物分子分離純化中應用最為廣泛的方法之一，依賴于正負電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質和多少的差異來進行分離。

Crysto Q離子交換介質以季銨基為功能基團偶聯(lián)在超高剛性瓊脂糖微球上，比Q Chromrose 6FF耐壓性更強，載量更高。Crysto Q為中等粒徑設計，應用于樣品的初步捕獲和中度純化。

應用領域：重組蛋白、抗體、核酸、病毒及類病毒顆粒、多糖等生物分子的分離純化。

產(chǎn)品信息：

使用方法：

1. 填料裝柱

Crysto Q 系列離子交換層析介質可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產(chǎn)量。將填料填裝到層析柱中，根據(jù)樣品中蛋白含量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

2. 填料準備

在裝柱前，填料要平衡到室溫，建議采用靜置沉淀法，確定膠懸液濃度，我們原包裝的填料以50%的濃度儲存在20%的 乙醇中。壓縮比在1.10~1.12。

通過真空抽濾，將填料中20%乙醇溶液更換為裝柱所需的溶液(例如水),重復以上步驟3次，最后用裝柱緩沖液重新懸浮填料，建議膠懸液濃度為50%~60%。

所需懸濁液體積(mL)=裝柱體積(mL) X 填料壓縮因子/膠懸濁液濃度

3. 層析柱準備

中壓層析柱和裝柱器在使用前，應用裝柱液潤洗，檢查層析柱完好無損傷，確保所選篩網(wǎng)(篩板)的孔徑和所選填料的粒徑相匹配，確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。

4. 析柱裝柱

1) 取清洗干凈的中壓層析柱，借助蛋白純化儀或注射器，用裝柱液通過下端接頭排空管線及篩板中的空氣， 也可用重力法排空篩板及管線中的空氣，在柱子底部保留25px 高左右的液體，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

2) 再次混勻膠懸液，確保懸液均一，借助玻璃棒將膠懸液緩慢且一次性貼壁倒入柱管中，用裝柱液沖洗柱管并加滿。注 意不要帶入氣泡。

注：當裝柱體積大于柱體積的50%以上時建議借助配套裝柱器裝柱。

3) 使其自然沉降，膠面上有1~50px澄清液時，將適配器管線連接設備，低流速運行，排出適配器管線中的氣泡，打開底部管線堵頭，將適配器以45°角放入玻璃管中，順時針擰緊上端固定帽，調(diào)節(jié)適配器使其O型圈浸入澄清液中，之后順時針擰緊上端調(diào)節(jié)帽。請確保整個操作在一條直線上完成，注意不要引入氣泡。

4) 可以采用高流速或者恒壓法壓至膠面清晰穩(wěn)定。讀取刻度并記錄，關閉流速。

5) 如用裝柱器裝柱，拆除裝柱器，用快速鎖將調(diào)節(jié)桿緩慢下移至膠面位置，將上端調(diào)節(jié)帽順時針擰緊，繼續(xù)運行上述流速，如果膠面發(fā)生改變，可以重新調(diào)節(jié)適配器高度。

6) 稍微擰松上端調(diào)節(jié)帽，按壓縮比確定最終柱床高度，擰緊上端調(diào)節(jié)帽，采用先下后上的方式擰緊上下端堵頭，裝柱完畢。

5. 樣品純化

5.1緩沖液準備

具體的緩沖體系應根據(jù)目標蛋白的穩(wěn)定性和等電點、離子交換介質的種類進行篩選和優(yōu)化。

建議使用緩沖液：

平衡緩沖液：50 mM  Tris-Hcl,pH8.0

洗脫緩沖液：50 mM  Tris-Hcl+1M NaCl, pH8.0

5.2 樣品準備

樣品在上樣前建議離心或用0.45μm 濾膜過濾，減少雜質，提高純化效率和防止堵塞柱子。

5.3 樣品純化

1) 平衡：用0.5~1 CV 洗脫緩沖液進行預平衡，再用5~10CV 的平衡緩沖液平衡層析柱，至流出液電導和pH 不變(與平衡液一致);

2) 進樣：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。

3) 淋洗：繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線；

4) 洗脫：可以根據(jù)實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質上的樣品。

5) 再生：每次層析之后可用0.5M~2M NaCl清洗層析柱，除去強結合的蛋白；

6) 如需二次上樣，可用平衡緩沖液清洗3~5CV,  待 pH 和電導率與平衡緩沖液基本一致即可使用。

6. 在位清洗

介質使用數(shù)次(具體次數(shù)與原料的種類和來源及實驗要求有關)后，需要對介質進行在位清洗；

1) 對于通過離子鍵強結合的蛋白，可用3CV 2MNaCl清洗，并用3CV以上的去離子水清洗；

2) 對沉淀蛋白、疏水性結合的蛋白，可用0.2M~0.5M NaOH 清洗(與層析介質接觸時間1~2小時),并用5CV以上平衡液和3CV以上的去離子水清洗；

3) 對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質，可用5CV以上的50%乙醇或30%異丙醇清洗，并用5CV-10CV以上的去離子水清洗。