貨號(hào)：F4506S

儲(chǔ)存條件：-20℃

同裂酶：PspLI, Pfl23II

注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BsiWI 屬于 Type IIP 型限制酶，識(shí)別回文序列。經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)Buffer 使 BsiWI最大限度發(fā)揮功能，同時(shí)反應(yīng)緩沖液包含重組白蛋白，其可增強(qiáng)多種酶的穩(wěn)定性。

建議反應(yīng)條件：1×Cut Buffer C；55℃溫育；參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系

本品在 37℃進(jìn)行酶切反應(yīng)時(shí)，有 25~50%的活性。

本品在LabFD Buffer中，有 25~50% 的活性。

失活條件：80℃溫育 20 min。

活性定義

活性單位(U)是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，55℃ 1h內(nèi)wan全酶切1 μg p615 所需的酶量。

質(zhì)量控制

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

最適反應(yīng)溫度下，將10 U BsiWI 與1 μg p615 共同溫育 16 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)

37℃下，使用10 U BsiWI消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22℃下使用T4 DNA Ligase可以將超過95% 酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

b. 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋)，然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；a. DNA 底物中應(yīng)不含ben酚、氣仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響 BsiWI 酶活性;

2）55℃溫育 15 min~1 h；

3）80°C溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或ben酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

2.注意事項(xiàng)

1）反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的 10%，避免酶中過多的甘油引起星號(hào)活性；

2）限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA 或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響