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產(chǎn)品中心分子生物學(xué)試劑內(nèi)切酶快速內(nèi)切酶 MboI
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
product
產(chǎn)品分類| 品牌 | LABLEAD | 供貨周期 | 一周 |
|---|
HhaI 快速內(nèi)切酶
貨號(hào)：F4510S
儲(chǔ)存條件：-20℃
同裂酶：HinP1I, CfoI, AspLEI, Hin6I, HspAI, BstHHI ；注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
產(chǎn)品組成：
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ HhaI | 100 μl |
10×LabFD™ Buffer | 1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 1ml |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對(duì)底物過(guò)量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。
LabFD™ Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。LabFD™ Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
建議反應(yīng)條件：
1×LabFD™緩沖液；37℃溫育；參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系
失活條件：80℃溫育 20 min。
質(zhì)量控制
功能活性檢測(cè)
37℃下，在20μl反應(yīng)體系中，1μl LabFD™ HhaI能夠在15min內(nèi)wan全消化1μg λDNA。
超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)
37℃下，在20μl反應(yīng)體系中，將 1 μl LabFD™ HhaI與 1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解。更長(zhǎng)時(shí)間酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
酶切-連接-再酶切檢測(cè)
37℃下，使用10倍酶量的 LabFD™ HhaI 消化 DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物，在22℃下使用 Fast T4 DNA Ligase可以將超過(guò)95% 酶切產(chǎn)物重新連接?？梢灾匦虑虚_(kāi)的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi)95% 以上的連接產(chǎn)物。
使用方法
1. DNA 快速酶切流程
1) 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：
質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA | |
ddH2O | 15μl | 16μl | 30μl |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2μl | 3μla | 5μl |
底物DNA | 2μl(up to 1ug) | 10μl(~0.2ug) | 10μl(5ug) |
LabFD™ HhaI | 1μl | 1μl | 5μl |
Total | 20μl | 30μl | 50μl |
a注：本體系適用于經(jīng)過(guò)純化的PCR產(chǎn)物酶切，未純化的PCR具備一定的離子強(qiáng)度，10xLabFDTMbuffer加入量可適當(dāng)減少至2μl。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會(huì)影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作，建議酶切前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；
3) 37℃溫育15min（質(zhì)粒），或15~30min（PCR產(chǎn)物），或30~60min（基因組DNA）；
4) 80℃溫育20min即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。
5) 如果使用LabFD™ Color Buffer進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。
1) 每種快速內(nèi)切酶的用量為1μl，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；
2) 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10；
3) 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。
3. 適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
DNA | 1μg | 2μg | 3μg | 4μg | 5μg |
LabFD™ HhaI | 1μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
Total | 20μl | 20μl | 30μl | 40μl | 50μl |
注：如果總反應(yīng)體系大于20ul，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
215 | 18 | 31 | 17 | 17 | 2 | 26 | 375 |
甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無(wú)影響 | 無(wú)影響 | 剪切受影響 | 無(wú)影響 | 無(wú)影響 |
在不同反應(yīng)緩沖液中的活性
LabFD™ Buffer | Thermo Scientific Fast Digest Buffer | NEB Cut Smart®Buffer | Takara Quick Cut™Buffer | |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
注：活性數(shù)據(jù)來(lái)自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。
010-60608020
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