說 明

α-Amylase，系統(tǒng)名稱為1,4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，別名為液化型Amylase、液化酶、α-1，4-糊精酶。黃褐色固體粉末或黃褐色至深褐色液體，含水量5%~8%。溶于水，不溶于乙醇或乙mi。α-Amylase是哺乳動物的一種主要消化酶，人體中Amylase水平的增加與唾液腺創(chuàng)傷，及唾液腺、胰腺發(fā)炎和腎功能衰竭引起的腮腺炎有關。本公司的α-Amylase測試盒運用α-Amylase裂解一種不溶性藍色直鏈淀粉成可溶性有色產(chǎn)物，在595nm處的吸光強度與樣品中Amylase的活性成正比。檢測范圍2 - 300 U/L。

應 用

直接檢測血清、血漿、唾液、尿液和其它生物樣品中α-Amylase的活性。

試劑盒組成與保存

底物試劑:   10 mL                              2-8°C保存

終止試劑:      5 mL                      2-8°C保存

校準液:  2 mL (相當于 550 U/L)               2-8°C保存

檢測步驟

樣品準備：新鮮的樣品最為理想。 冷凍條件下，α-Amylase一個月內保持穩(wěn)定。EDTA, EGTA和檸檬酸鹽是α-Amylase的抑制劑，在樣品準備中應避免使用。

1. 反應：在標記好的1.5mL離心管中加入10 mL 樣品。然后加入 190 mL 底物試劑，振蕩混合后培養(yǎng)5分鐘。

注意：底物試劑包含的藍色不溶性物質會形成沉淀。量取前應當?shù)怪闷?/span>10數(shù)次以使底物維持懸浮狀，再迅速將底物轉移到樣品離心管。如果測試要在 37°C下進行，應在添加樣品之前將底物加熱至該溫度。

 對空白對照管，需加10 mL水, 190 mL 底物試劑和 80 mL 終止試劑?；蛘甙匆韵马樞驕蕚淇瞻讓φ眨?/span>10 mL 樣品， 80 mL 終止試劑和190 mL 底物試劑。 如果樣品背景顏色是明顯的藍色，這一步很必要。

2. 將80 mL 終止試劑加入每個樣品離心管中。振蕩混合并以14,000 rpm速度離心5分鐘，小心地將200 mL 上清液轉移至透明平底96孔板的孔中。

3.在不同的孔中，加入200 mL 水和 200 mL 校準液。讀取595nm 處吸光度。

4. 濃度計算: α-Amylase活性計算如下：

OD樣品 和OD空白 分別是樣品和空白的OD595nm 值，OD校準液 和 ODH2O 分別是校準液和水的OD595nm值。n 是稀釋系數(shù)，“550" 是校準液在測試環(huán)境下的等效活性(U/L)。

注：如果計算出的活性高于300 U/L，將樣品用水稀釋后重復測試，結果需要乘以稀釋系數(shù)n。

單位定義：在測試環(huán)境下(pH 7.0)，一個酶活性單位是指每分鐘催化產(chǎn)生1 mmole 產(chǎn)物。

注意事項：本產(chǎn)品僅供研究用，使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。