酵母營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基配制

液體培養(yǎng)基：

8g粉狀培養(yǎng)基LABLEAD系列選擇培養(yǎng)基加950 ml水,常規(guī)高壓滅菌后再加50ml 40%過濾除菌的無菌葡萄糖。（備注：YPD、YPDA和YPD plus這三種系列不需要再加糖，直接按瓶子上標(biāo)簽指示加水配制即可）。配制液體培養(yǎng)基不需要調(diào)pH，因為酵母偏好酸性條件生長。如果為了實驗方便，葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌（見下面標(biāo)準配制法注解）。

固體培養(yǎng)基：

8g粉狀培養(yǎng)基加950 ml, 用NaOH調(diào)pH至大致范圍5.8~6.5, 然后按20g/L加瓊脂粉, 高壓滅菌后再加預(yù)溫的50ml 40%無菌葡萄糖, 搖勻后傾倒平皿(備注:如不調(diào)pH, 瓊脂在酸性條件下會產(chǎn)生崩解)。如果為了實驗方便，葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌。

標(biāo)準配制法：

標(biāo)準流程要求葡萄糖過濾除菌，因為葡萄糖與培養(yǎng)基中的氨基酸在高溫高壓下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。但有些實驗者為方便起見，將固體葡萄糖按2% 的量(按每升20克)直接加到培養(yǎng)基后一起高壓滅菌，雖然酵母也可以生長，但一般不推薦這種將葡萄糖高壓滅菌的方法。如果實在要圖省事想用這種方法，那么一定要控制好高壓時間在18-20min結(jié)束，待壓力下降和溫度降到安全范圍后應(yīng)盡快取出。否則液體顏色會變成黃色而對酵母特性發(fā)生不可預(yù)知的影響。但半乳糖和棉子糖不能高壓滅菌，只能用過濾除菌制備，建議制備高濃度40%的儲存液，按計算好的體積加到高壓滅菌的培養(yǎng)基使得終濃度為2%。

說明：

用于組成型表達（如酵母雙雜交、酵母單雜交）以及其它采用組成型啟動子的實驗一般都加葡萄糖；誘導(dǎo)型表達如采用GAL1啟動子載體的表達一般都加半乳糖和棉子糖。葡萄糖可以勉強高壓滅菌，但半乳糖和棉子糖是絕對不能高壓滅菌的, 應(yīng)采用無菌過濾法先制備40%的無菌儲備液，待不含糖的培養(yǎng)基高壓滅菌后按最終應(yīng)用濃度為2%的量計算需要加入的無菌液體糖儲存液：

如配制1升培養(yǎng)基則稱取8克培養(yǎng)基加水950 ml，常規(guī)高壓滅菌（121°C 20min）完成后待溫度降至安全范圍70°C時趁熱立刻加入50ml 40%過濾除菌的無菌糖，充分混勻。