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產(chǎn)品中心

Product Center

當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心蛋白研究蛋白純化P0233-5mlProtein A/G-agarose

Protein A/G-agarose
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Protein A/G-agarose主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗體的純化。Protein A+G Agarose主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗體的純化。

產(chǎn)品型號(hào):P0233-5ml
更新時(shí)間:2026-01-08
廠商性質(zhì):代理商
訪問量:540
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品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥

Protein A+G agarose

貨號(hào):P0233

儲(chǔ)存條件:4℃保存,有效期一年。請(qǐng)勿冷凍。


產(chǎn)品描述

Protein A+G Agarose主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗體的純化。

Protein A是一種發(fā)現(xiàn)于jin黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細(xì)胞壁表面蛋白,分子量為42kDa;Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達(dá)的免疫球蛋白結(jié)合蛋白。Protein A和Protein G功能相似,兩者對(duì)于不同的免疫球蛋白亞類的結(jié)合能力有所不同。適當(dāng)重組改造的Protein A、G與瓊脂糖凝膠(agarose)以一定的方式結(jié)合,可用于免疫沉淀或抗體的純化。

Protein A+G Agarose適合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose單獨(dú)可以免疫沉淀的抗體,包括human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,rabbit IgG,rabbit、goat多克隆抗體。

本產(chǎn)品中的Protein A和Protein G共價(jià)連接到4%的高交聯(lián)度、高流速瓊脂糖上,并按1:1比例混合。每mlProtein A+G agarose beads (沉淀物)可以結(jié)合超過40mg human IgG。本產(chǎn)品中agarose beads的平均直徑為45-165μm,抗體純化時(shí)的推薦線性流速為50-300cm/h,耐壓指數(shù)最高為0.1MPa。  

本Protein A+G Agarose 如果用于常規(guī)的免疫沉淀,每ml本產(chǎn)品可以免疫沉淀50次。

注意事項(xiàng)

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2. Protein A+G Agarose使用前一定要充分重懸,即充分顛倒若干次使混合均勻。

3. 本產(chǎn)品含有微量的防腐劑,不會(huì)影響常規(guī)的免疫沉淀和抗體純化。但如果后續(xù)涉及酶活性測(cè)定,使用本產(chǎn)品前宜先用TBS等適當(dāng)溶液洗滌Protein A+G agarose beads三次,以充分消除防腐劑可能產(chǎn)生的干擾。

4. 從蛋白樣品收集開始,所有步驟中蛋白樣品都必須在4度或冰上操作。

5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明:

1. 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)

a. 蛋白樣品的準(zhǔn)備:

(a) 對(duì)于10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中的貼壁細(xì)胞,吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,PBS洗滌一次,然后加入500ul至2ml細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞??梢允褂肔ABLEAD生產(chǎn)的Western及IP細(xì)胞裂解液或各種RIPA裂解液等進(jìn)行細(xì)胞的裂解。

(b) 對(duì)于組織樣品參考貼壁細(xì)胞使用裂解液的比例進(jìn)行裂解。

(c) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞后,PBS洗滌一次,然后參考貼壁細(xì)胞的裂解方法進(jìn)行裂解。

注:詳細(xì)的裂解方法參考不同裂解液的詳細(xì)使用方法。對(duì)于不同的培養(yǎng)器材,參考10cm培養(yǎng)皿的裂解液的用量進(jìn)行裂解。如果裂解獲得的蛋白樣品濃度過高,可以用裂解液或PBS適當(dāng)稀釋,如果蛋白樣品濃度過低,在以后的裂解過程中宜適當(dāng)減少裂解液的用量。

b. 去除非特異性結(jié)合(可選做)

(a) 取200ul至1ml蛋白樣品,蛋白量約為200ug至1mg,加入約1ug和免疫沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的普通IgG 和20ul充分重懸的Protein A+G Agarose,4oC緩慢搖動(dòng)30min至2h。

(b) 2500rpm(約1000g)離心5min,取上清用于后續(xù)的免疫沉淀。

注:所謂種屬相同的IgG是指后續(xù)免疫沉淀時(shí)用的是小鼠IgG,則在本步驟中可以加入normal mouse IgG,如無normal IgG,可以加入其它不影響后續(xù)檢測(cè)的其它mouse IgG類型的抗體。通過和normal IgG和Protein A+G Agarose的孵育,可以充分降低非特異性的結(jié)合,降低背景。

c. 免疫沉淀:

(a) 加入0.2-2ug用于免疫沉淀的一抗,4oC緩慢搖動(dòng)過夜。

(b) 再加入20ul充分重懸的Protein A+G Agarose,4oC緩慢搖動(dòng)1-3h(為方便后續(xù)的洗滌操作,可以把加入充分重懸的Protein A+G Agarose的量調(diào)整為40ul)。

(c) 2500rpm(約1000g)離心5min,或瞬時(shí)高速離心,小心吸除上清,注意寧可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G Agarose

(d) 用準(zhǔn)備蛋白樣品時(shí)的裂解液或PBS洗滌沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次為0.5-1ml。洗滌時(shí)離心條件和吸除上清的要求同步驟(c)。

(e) 完成最后一次洗滌后,去除上清,加入20-40ul 1X SDS-PAGE電泳上樣緩沖液Vortex重懸沉淀,瞬時(shí)高速離心把樣品離心至管底。

(f) 100oC或沸水浴處理3-5min,取部分或全部樣品用于SDS-PAGE電泳,暫時(shí)不用的樣品可以-20oC保存。


2. 免疫共沉淀:

參考免疫沉淀的方法進(jìn)行,但免疫共沉淀(Co-IP)通常必須使用未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。普通的免疫沉淀雖然可以使用凍

存的蛋白樣品,但也宜用新鮮的蛋白樣品為佳。

3. 抗體純化:

a. 準(zhǔn)備工作:

(a) 用0.45um或0.2um孔徑的濾膜過濾所用的溶液。

(b) 所有的溶液必須用超聲等方法脫氣(degas)

(c) 選擇適當(dāng)?shù)募兓?,用適當(dāng)量的Protein A+G Agarose裝填純化柱。也可使用LABLEAD的預(yù)裝柱產(chǎn)品。

(d) 用10-20倍柱體積的TBS洗滌并平衡純化柱,流速可以用恒流泵控制為1ml/min (1ml預(yù)裝柱)。如無恒流泵,也可以完quan依靠重力洗滌并平衡純化柱。

b. 抗體純化:

(a) 把含有待純化的抗體上樣到純化柱。

(b) 待純化的抗體過柱后,用10-20倍柱體積的TBS洗滌,以去除未結(jié)合和非特異性結(jié)合的蛋白。洗滌是否完quan可以通過測(cè)定280nm的吸光度進(jìn)行確定。

(c) 洗滌完后,用10ml 50mM glycine,pH2.7作為洗脫液,洗脫結(jié)合的抗體。某些抗體和Protein A+G的結(jié)合能力很強(qiáng),在pH2.7時(shí)洗脫效果不太理想,可以使用50mM glycine,pH1.9作為洗脫液。分管收集洗脫下的抗體,根據(jù)蛋白濃度或后續(xù)的檢測(cè)效果確定洗脫峰在哪幾個(gè)收集管中。

c. 純化柱的再生:

(a) 用10-20倍柱體積的TBS洗滌純化柱,使純化柱達(dá)到中性的pH (b) 用TBS來保存再生的純化柱。



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