LabFect SP懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：T1024

存儲(chǔ)條件：藍(lán)冰運(yùn)輸，4°C 保存，超一個(gè)月不用于-20°C儲(chǔ)存，-20℃保存條件下，有效期為 1 年。避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

卓yue的懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率一般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；

極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響；

轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣，絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。

產(chǎn)品介紹

LabFect 可用來轉(zhuǎn)染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞。目前， 無論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，懸浮細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑。LabFect 能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。對(duì)于大多數(shù)懸浮細(xì)胞，LabFect 的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在 75%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%。LabFect 的使用也極其簡(jiǎn)便，先將 sRNA 與 LabFect 室溫混合，再將siRNA-LabFect 混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。

應(yīng)用：

siRNA 轉(zhuǎn)染

antisense RNA 轉(zhuǎn)染

200bp 內(nèi)的小分子 DNA 轉(zhuǎn)染

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)證明，無生物污染。

操作步驟：本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。 

1. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔500 μl培養(yǎng)基，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%，盡量不要使用抗生素。

2.  siRNA-Labfect SP混合物準(zhǔn)備：

2.1  6pmol siRNA 用 50μl 無血清培養(yǎng)基稀釋。

2.2  2μl Labfect SP用 50μl 無血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育 5min。

注意：確保在 25 min 內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲。   

2.3 孵育 5min 后，將 siRNA 稀釋液與 Labfect SP稀釋液混合（總體積 100μl）。輕輕混勻，室溫孵育 20 min。

3.  將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（*培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

3.1  將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有 0.5ml 培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板 5min，混勻。

3.2  37°C培養(yǎng)48-72h，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短，取決于細(xì)胞類型、 所干擾基因本身及分析方法?？稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定最jia孵育時(shí)間。

注意事項(xiàng):

1. 懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度較大，首ci轉(zhuǎn)染時(shí)，請(qǐng)務(wù)必對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。例如：24 孔培養(yǎng)板，可進(jìn)行如下交叉實(shí)驗(yàn)：

2. 轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)保持良好，密度不能過大，培養(yǎng)液盡量不要使用抗生素，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加。

3. 為了提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔 1 小時(shí)人工晃動(dòng) 1 次。

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels