不同
活性氧檢測(cè)試劑盒基于不同的檢測(cè)原理,各有其特點(diǎn)和適用范圍。在實(shí)際應(yīng)用中,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、樣本?lèi)型以及檢測(cè)條件等因素綜合考慮,選擇合適的試劑盒,以準(zhǔn)確檢測(cè)活性氧水平,為相關(guān)研究提供可靠的數(shù)據(jù)支持。活性氧(ROS)是生物體內(nèi)一類(lèi)具有高活性的含氧化合物,包括超氧陰離子、過(guò)氧化氫、羥基自由基等。它們?cè)诩?xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、免疫防御等生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用,但過(guò)量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激,損傷細(xì)胞成分,與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,準(zhǔn)確檢測(cè)活性氧水平對(duì)研究細(xì)胞生理病理機(jī)制意義重大,而活性氧檢測(cè)試劑盒就是常用的檢測(cè)工具,不同試劑盒工作原理有所不同。
化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒
這類(lèi)試劑盒主要基于活性氧與特定化學(xué)發(fā)光物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光子的原理。例如,常見(jiàn)的魯米諾在活性氧(如過(guò)氧化氫,在辣根過(guò)氧化物酶的催化下)作用下,會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng),反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這些中間體回到基態(tài)時(shí),就會(huì)釋放出光子。通過(guò)檢測(cè)光子的強(qiáng)度,就可以間接反映活性氧的含量。光子強(qiáng)度與活性氧的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,利用專(zhuān)門(mén)的發(fā)光檢測(cè)儀器測(cè)量光子信號(hào),經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)校準(zhǔn)后就能確定樣本中活性氧的水平。
熒光法檢測(cè)試劑盒
熒光法是應(yīng)用較為廣泛的檢測(cè)方式。其原理是利用能與活性氧特異性結(jié)合的熒光探針。這些探針本身沒(méi)有熒光或者熒光較弱,當(dāng)與活性氧發(fā)生反應(yīng)后,探針的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而產(chǎn)生熒光或者熒光強(qiáng)度發(fā)生變化。比如,二氯二氫熒光素二乙酯(DCFH-DAE)是一種常用的檢測(cè)活性氧的熒光探針,它本身無(wú)熒光,進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成DCFH,DCFH無(wú)熒光,但可被活性氧氧化成熒光物質(zhì)DCF,熒光強(qiáng)度與活性氧的量相關(guān)。通過(guò)熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光分光光度計(jì)等設(shè)備檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱,進(jìn)而對(duì)活性氧進(jìn)行定量或定性分析。
比色法檢測(cè)試劑盒
比色法檢測(cè)試劑盒依據(jù)活性氧與特定顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化的特性來(lái)檢測(cè)。當(dāng)活性氧與顯色劑作用時(shí),會(huì)使顯色劑的顏色發(fā)生深淺變化,這種顏色變化與活性氧的含量存在對(duì)應(yīng)關(guān)系。例如,某些試劑盒中的顯色劑在與過(guò)氧化氫反應(yīng)后,會(huì)生成有色產(chǎn)物,通過(guò)使用分光光度計(jì)測(cè)量溶液在特定波長(zhǎng)下的吸光度,再根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),就可以計(jì)算出樣本中活性氧的濃度。這種方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單,不需要昂貴的檢測(cè)設(shè)備,適合一些對(duì)檢測(cè)條件要求不高的場(chǎng)合。